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Sanger測序

服務(wù)介紹  Service Introduction

            艾基生物擁有多臺ABI 3730XL測序儀,  有近十年的 Sanger 測序經(jīng)驗，針對樣品的復(fù)雜程度摸索出一系列的解決方案，并且在 Sanger 測序平臺的基礎(chǔ)上將應(yīng)用擴展至分子生物學(xué)上游的多個領(lǐng)域，包括：SNP 檢測，片段分析， SSR/STR 分型， 基因檢測， 菌種鑒定， 線粒體測序， 基因組測序，跑板等服務(wù)。

資料下載  Download

        艾基生物Sanger測序電子訂單

平臺優(yōu)勢  Service Advantages

        質(zhì)量穩(wěn)定：精確讀長達(dá) 800 bp 以上，有效讀長度超過 900 bp。

        準(zhǔn)確度高：QV20+ 和 CRL 值 >1000。

        時效性強：日均處理量 >2000 個反應(yīng)，結(jié)果及時、準(zhǔn)確，最快 24 小時出結(jié)果。

        困難模板：成熟的方案應(yīng)對 High GC，AT rich，發(fā)夾結(jié)構(gòu)，重復(fù)序列。

        一站式服務(wù)：基因組提取、引物設(shè)計、PCR 擴增、Primer Walking、測序及結(jié)果分析。

技術(shù)流程 Technical Procedures

樣品要求 Sample Requirenments

      【菌液和平板】

        需過夜培養(yǎng)的菌液，至少提供 200 ul；無需培養(yǎng)可直接提取的樣品，請?zhí)峁?nbsp;2-4 ml 過夜培養(yǎng)的菌液；

        樣品請注明抗性，常備抗生素：氨芐青霉素 (Amp)、卡那霉素 (Kan)、氯霉素 (Chl)；

        若菌液所含質(zhì)粒為超低拷貝，請直接提供質(zhì)粒；

        除大腸桿菌以外的菌液，請直接提供質(zhì)粒。

        【質(zhì)粒】

        濃度 >50 ng/ul，總體積不少于 10 ul；

        請確保質(zhì)粒溶解于滅菌的雙蒸水中，TE 溶解的質(zhì)粒會造成反應(yīng)失敗。

        【PCR 產(chǎn)物】

        已純化 PCR 產(chǎn)物：請確保 DNA 溶解于滅菌的雙蒸水中，濃度 >30 ng/ul，總體積不少于 20 ul。

        未純化 PCR 產(chǎn)物：請注明片段長度，條帶是否單一，原液總體積不少于 20 ul；

        片段 < 100 bp 建議克隆后測序，片段 > 4 kb 建議分段擴增后測序。

        【測序引物】

        濃度 ≥ 5 pmol/ul，總體積不少于 10 ul，并確保溶解于滅菌的雙蒸水中；

        測序引物長度盡量控制在 20-30 bp，引物過短或過長均會影響測序質(zhì)量；

        含兼并堿基熒光標(biāo)記或修飾的引物不適用于測序。

注意事項  Notes

樣品登記表需按要求填寫詳細(xì)，避免問題訂單帶來的實驗延誤；

確保樣品與登記表名稱一致，可包含“字母”“數(shù)字”“—”；請避免出現(xiàn) 漢字、拉丁字母及其他特殊字符；

填寫“測通”的樣品會默認(rèn)拼接，“雙向”測序的樣品如需拼接請注明；

如樣品為菌液或平板，請注明抗生素類型；

若測序引物不是通用引物，請自備或委托合成，選擇引物類型（通用 / 新送 / 已送 / 需合成）并注明濃度；

若送測質(zhì)粒不是常用載體，通用引物請寫明引物全稱；

未純化 PCR 產(chǎn)物若已檢測為單一條帶，請在訂單中注明，可大大提高測序成功率；

存在特殊結(jié)構(gòu)的，如：High GC、AT rich、重復(fù)序列、發(fā)夾結(jié)構(gòu)請在訂單上備注；

大量樣品送測時，請使用電子訂單，方便核對且不易出錯。