1.什么是細(xì)胞系鑒定？

       所謂細(xì)胞系鑒定即通過 STR（短串聯(lián)重復(fù)）圖譜所建立細(xì)胞系的遺傳特征。一株細(xì)胞系的遺傳特征確立后，細(xì)胞系可以通過定期的檢測，以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。

2.為什么要進行細(xì)胞系鑒定？

       首先進行細(xì)胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細(xì)胞來進行，這些細(xì)胞可能是受贈于其它研究人員,也可能是從細(xì)胞庫(如美國?ATCC,American?Type?Culture?Collection)得來。據(jù)估計，15-20%的實驗室，實驗中所使用的細(xì)胞已經(jīng)不是原來的細(xì)胞系，或者與其它細(xì)胞系發(fā)生了交叉污染。顯然，細(xì)胞系遭到污染、特征鑒別錯誤，將會極大的威脅著基于這些細(xì)胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此，很多細(xì)胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細(xì)胞系進行鑒定，并對細(xì)胞系之間的交叉污染進行監(jiān)測。

       現(xiàn)在很多機構(gòu)都已經(jīng)認(rèn)識到這個的重要性，ATCC和FDA，這些機構(gòu)要求對用于制藥領(lǐng)域的實驗中所使用的材料,如細(xì)胞系,應(yīng)該進行“身份鑒定”和純度測試。很多雜志也要求使用細(xì)胞系的文章提供STR指紋圖譜數(shù)據(jù)。FDA建議研究人員在培養(yǎng)細(xì)胞的較早階段(細(xì)胞培養(yǎng)第一周)來鑒定細(xì)胞系的身份。細(xì)胞在被凍存前應(yīng)再一次進行鑒定；對于活躍生長的細(xì)胞，每兩個月應(yīng)鑒定一次；文獻(xiàn)發(fā)表前也應(yīng)對細(xì)胞系身份進行鑒定。如果一個實驗室使用不止一種細(xì)胞系，則應(yīng)在實驗最開始時，就要對所有的細(xì)胞系進行鑒定，以便排除交叉污染。這樣將減少由于細(xì)胞系發(fā)生交叉污染或身份誤認(rèn)，將導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)的無效或數(shù)據(jù)誤導(dǎo)。

3.細(xì)胞系用錯的概率有多大？

       據(jù) ATCC 估計，1977 年錯誤使用細(xì)胞的概率是 16%，1999 年是 18%。根據(jù)我們的經(jīng)驗，國內(nèi)細(xì)胞系用錯的概率不低于 20%。即如果一個研究所有二十個課題組，按概率估計，有 4 個課題組用的細(xì)胞是錯的。

4.什么細(xì)胞最容易污染別的細(xì)胞？

       Hela 細(xì)胞。五十多年來，Hela細(xì)胞系被廣泛用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的研究，對當(dāng)代生命科學(xué)的發(fā)展屢建奇功，是名副其實的生物學(xué)研究的親歷踐行者。同時很多被廣泛研究的細(xì)胞系都被Hela細(xì)胞淹沒，因為她長得快，當(dāng)你發(fā)現(xiàn)自己的一個培養(yǎng)瓶里的細(xì)胞突然長得很好，而以后都用它傳代做實驗的話，十之八九是搞錯了。

       早在1967年，遺傳學(xué)家Stanley Gartler發(fā)現(xiàn)HEp-2和INT 407這兩種細(xì)胞系都是生物學(xué)領(lǐng)域研究最多的腫瘤細(xì)胞系——Hela細(xì)胞。

5.有哪些細(xì)胞曾被 Hela 污染

       lnt-407、HEp-2、WISH （人羊膜細(xì)胞）、Acc-M（人原發(fā)性延腺癌細(xì)胞）、Bcap-37（人乳腺癌細(xì)胞）、HAC-84（人肺腺癌克隆）、Hepatoma（人肝癌細(xì)胞）、HUL-42（人肺腺癌細(xì)胞）、CNE（人鼻咽癌細(xì)胞）、SPC-A-1（人肺腺癌細(xì)胞）、Tca-8113（人舌鱗癌細(xì)胞）、YTMLC（個舊肺鱗癌細(xì)胞）等一百余種。

6.什么時候需細(xì)胞系鑒定

1）當(dāng)建立或獲得一個新的細(xì)胞系時；

2）一個涉及到細(xì)胞試驗項目開始/結(jié)束時；

3）在細(xì)胞凍存之前，或細(xì)胞已連續(xù)培養(yǎng) 2～3 個月時；

4）發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費前；

5）細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時；

6）當(dāng)實驗室使用超過一種細(xì)胞系時，所有細(xì)胞系最好先鑒定以排除交叉污染的可能；

7.如何知道細(xì)胞系是否發(fā)生交叉污染了

       如果存在細(xì)胞系之間發(fā)生交叉污染，而且鑒定用的細(xì)胞可能有兩種以上的細(xì)胞系時，那么在進行 STR 位點檢測的時候，多個位點會出現(xiàn)兩個以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號強度，理論上峰值與樣本的 DNA 濃度有直接的關(guān)系。因此，存在交叉污染的混合細(xì)胞系中，其中一個位點中某些峰會明顯高于其他的峰，其中大峰是屬于混合細(xì)胞系中那個主要細(xì)胞系，而小峰則屬于那個次要細(xì)胞系。

       值得注意的是，當(dāng)發(fā)生兩個或以上細(xì)胞混合的時候，檢測結(jié)果看起來非常像細(xì)胞系的“遺傳不穩(wěn)定”——當(dāng)一個細(xì)胞系存在亞群時，尤其是一些癌細(xì)胞系， 由于遺傳不穩(wěn)定的存在，在一些位點的 STR 特性會不同。因此經(jīng)驗豐富的分子專家是非常重要的，他能夠幫助分析復(fù)雜的電泳圖譜（STR 峰圖），從而判斷是否由于發(fā)生細(xì)胞系交叉污染而導(dǎo)致多等位基因情況。

8.如何根據(jù) STR 數(shù)據(jù)判斷細(xì)胞系的身份

       收到細(xì)胞系鑒定結(jié)果以及 STR 信息，可以與參考數(shù)據(jù)庫進行比對。如果細(xì)胞樣本的每個 STR 位點和參考細(xì)胞 STR 位點都能重合匹配，即說明該細(xì)胞系正確，反之則說明你的細(xì)胞系可能被錯誤標(biāo)記，交叉污染或發(fā)生遺傳不穩(wěn)定。一般說來，匹配度≥80%即可認(rèn)為該細(xì)胞系正確，匹配度＜80%則說明該細(xì)胞系的來源需要被懷疑。

       如果細(xì)胞系被鑒定出發(fā)生交叉污染或錯誤標(biāo)記，則需要拿更早代數(shù)的細(xì)胞進行鑒定，從而找到問題的起源或者直接從可靠的機構(gòu)購買一株新的細(xì)胞系。

9.如果細(xì)胞系沒有在數(shù)據(jù)庫中比對出結(jié)果怎么辦？

       如果已知數(shù)據(jù)庫中沒有找到你的細(xì)胞信息，你可以用自己的細(xì)胞遺傳信息建立自己的遺傳特性，以便后期進行自己細(xì)胞庫的比對。

10.為什么報告內(nèi)最終結(jié)論，會出現(xiàn)匹配不上任何已知數(shù)據(jù)情況？

       最大的可能性是因為這株細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)序列并沒有收錄在國際的細(xì)胞庫之中，導(dǎo)致送檢樣本與任何的序列都不匹。出現(xiàn)這種情況大多數(shù)是因為該細(xì)胞系，可能是由國內(nèi)課題組自主建系的。